酶抑制率法檢測原理:
多通道農(nóng)藥殘留速測儀采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T規(guī)定的分析方法。該方法采用酶抑制率法(分光光度法),分析原理是基于一種生物化學(xué)反應(yīng),即在正常情況下乙酰膽堿(底物)在乙酰膽堿酯酶的作用下發(fā)生水解反應(yīng),生成膽堿和乙酸,生成的膽堿與二硫雙對硝基苯甲酸(顯色劑)產(chǎn)生顯色反應(yīng),使反應(yīng)液呈黃色。如果樣品中帶有有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,由于農(nóng)藥的存在能抑制酶的活性,使上述生物化學(xué)反應(yīng)速度減慢,從而使水解反應(yīng)生成的膽堿減少,使顯色反應(yīng)產(chǎn)生的黃色變淺。通過測量一段反應(yīng)時間內(nèi)溶液顏色的變化率(吸光度隨時間的變化值),即表示為農(nóng)藥抑制酶活性的抑制率。通過測量抑制率的大小,可以判斷出樣品中是否有高劑量農(nóng)藥的存在。
酶抑制率法產(chǎn)生假陽性問題的原因:
酶抑制率法測定某些蔬菜中農(nóng)藥殘留量存在假陽性,這一點在國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T說明中就明確指出:“蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性”。
綜合文獻資料和研究,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生假陽性的原因:
1.某些蔬菜樣品中含有對酶有抑制作用的植物次生物質(zhì),它同樣也能起到農(nóng)藥抑制酶活性的作用,故會使測定結(jié)果偏高,即產(chǎn)生假陽性,嚴(yán)重時使酶*失去活性,導(dǎo)致無法測量(如蒜)。
2.另一類蔬菜色素含量高(如韭菜含葉綠素高),汁液多(如番茄等),經(jīng)樣品處理后會使測試溶液帶色或發(fā)渾,而這些帶色或發(fā)渾的溶液在測試時容易發(fā)生變化,從而影響光度法的測定。